西 安 赫 特 生 物 科 技 有 限 公 司
Xi'an Hat Biotechnology Co., Ltd
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常用貯存液的配制

1)30%丙烯酰胺溶液

  將29g丙烯酰胺和1g N,N’-亞甲雙丙烯酰胺溶于總體積為60mL的水中。加熱至37℃溶解之,補加水至終體積為100mL。用Nalgene濾器(0.45μm孔徑)過濾除菌,查證該溶液的pH值應不大于7.0,置棕色瓶中保存于室溫。

  【注意】

  丙烯酰胺具有很強的神經毒性并可以通過皮膚吸收,其作用具累積性。稱量丙烯酰胺和亞甲雙丙烯酰胺時應戴手套和面具。可認為聚丙烯酰胺無毒,但也應謹慎操作,因為它還可能會含有少量未聚合材料。

  一些價格較低的丙烯酰胺和雙丙烯酰胺通常含有一些金屬離子,在丙烯酰胺貯存液中加入大約0.2體積的單床混合樹脂(MB-1Mallinckrodt),攪拌過夜,然后用Whatman1號濾紙過濾以純化之。

  在貯存期間,丙烯酰胺和雙丙烯酰胺會緩慢轉化成丙烯酰和雙丙烯酸。

2)40%丙烯酰胺

  把380g丙烯酰胺(DNA測序級)和20g N,N’-亞甲雙丙烯酰胺溶于總體積為600mL的蒸餾水中。繼續按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法處理,但加熱溶解后應以蒸餾水補足至終體積為1L

  【注意】

  見上述配制30%丙烯酰胺的說明,40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列測定。

3)放線菌素D溶液

  把20mg放線菌素D溶解于4ml100%乙醇中,110稀釋貯存液,用100%乙醇作空白對照讀取OD440值。放線菌素D(分子量為1255)純品在水溶液中的摩爾消化系數為21900,故而1mg/ml的放線菌素D溶液在440nm處的吸光值為0.182,放線菌素D的貯存液應放在包有箔片的試管中,保存于-20℃

  【注意】

  放線菌素D是致畸劑和致癌劑,配制該溶液時必須戴手套并在通風櫥內操作,而不能在開放在實驗桌面上進行,謹防吸入藥粉或讓其接觸到眼睛或皮膚。

  藥廠提供的作治療用途的放線菌素D制品常含有糖或鹽等添加劑。只要通過測量貯存液在440nm波長處的光吸收確定放線菌素D的濃度,這類制品便可用于抑制自身引導作用。

4)溴化乙錠(10mg/ml溶液)

  在100mL水中加入1g溴化乙錠,磁力攪拌數小時以確保其完全溶解,然后用鋁箔包裹容器或轉移至棕色瓶中,保存于室溫。

  【注意】

  小心:溴化乙錠是強誘變劑并有中度毒性,使用含有這種染料的溶液時務必戴上手套,稱量染料時要戴面罩。


5)2×HEPES緩沖鹽溶液

  用總量為90ml的蒸餾水溶解1.6g NaCl0.074gKCl0.027gNa2PO4·2H2O0.2g葡聚糖和1gHEPES,用0.5mol/lNaOH調節 pH值至7.05,再用蒸餾水定容至100ml。用0.22μm濾器過濾除菌,分裝成5ml小份,貯存于-20℃

6)IPTG溶液

IPTG為異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(分子量為238.3),在8ml蒸餾水中溶解2g IPTG后,用蒸餾水定容至10ml,用0.22μm濾器過濾除菌,分裝成1ml小份貯存于-20℃


7)1mol/L乙酸鎂溶液

  在800ml水中溶解214.46g四水乙酸鎂,用水定容至1L過濾除菌。


8)1mol/L MgCl2溶液

  在800ml水中溶解203.4gMgCl2·6H2O,用水定容至1L,分裝成小份并高壓滅菌備用。

  【注意】

MgCl2極易潮解,應選購小瓶(如100g)試劑,啟用新瓶后勿長期存放。


9)β-巰基乙醇(β-ME)溶液

  一般得到的是14.4mol/L溶液,應裝在棕色瓶中保存于4℃

  【注意】

β-ME或含有β-ME的溶液不能高壓處理。


10)NBT溶液

  把0.5g氯化氮藍四唑溶解于10ml70%的二甲基甲酰胺中,保存于4℃


11)/氯仿溶液

  把酚和氯仿等體積混合后用0.1mol/LTris·HCl(pH7.6)抽提幾次以平衡這一混合物,置棕色玻璃瓶中,上面覆蓋等體積的0.01mol/lTris·HCl(pH7.6)液層,保存于4℃

  【注意】

酚腐蝕性很強,并可引起嚴重灼傷,操作時應戴手套及防護鏡,穿防護服。所有操作均應在化學通風櫥中進行。與酚接觸過的部位皮膚應用大量的水清洗,并用肥皂和水洗滌,忌用乙醇。

12)10mmol/L苯甲基磺酰氟(PMSF)溶液

  用異丙醇溶解PMSF1.74mg/ml(10mmol/L),分裝成小份貯存于-20℃。如有必要可配成濃度高達17.4mg/ml的貯存液(100mmol/L)

  【注意】

PMSF嚴重損害呼吸道粘膜、眼睛及皮膚,吸入、吞進或通過皮膚吸收后有致命危險。一旦眼睛或皮膚接觸了PMSF,應立即用大量水沖洗之。凡被PMSF污染的衣物應予丟棄。

PMSF在水溶液中不穩定。應在使用前從貯存液中現用現加于裂解緩沖液中。

13)磷酸鹽緩沖溶液(PBS)溶液

800ml蒸餾水中溶解8g NaCl0.2g KCl1.44g Na2HPO40.24g KH2PO4,HCl調節 溶液的pH值至7.4加水定容至1L,在15lbf/in2(1034×105Pa)高壓下蒸氣滅菌20min。保存于室溫。

14)1mol/L乙酸鉀(pH7.5)溶液

  將9.82g乙酸鉀溶解于90ml純水中,用2mol/L乙酸調節 pH值至7.5后加入純水定容到1L,保存于-20℃


15)乙酸鉀溶液(用于堿裂解)

  在60ml5mol/L乙酸鉀溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml水,即成鉀濃度為3mol/L而乙酸根濃度為5mol/L的溶液。


16)3mol/L乙酸鈉(pH5.2pH7.0)溶液

  在80ml水中溶解408.1g三水乙酸鈉,用冰乙酸調節 pH值至5.2或用稀乙酸調節 pH值至7.0,加水定容到1L,分裝后高壓滅菌。


17)5mol/L NaCl溶液

  在800ml水中溶解292.2gNaCl加水定容至1L,分裝后高壓滅菌。


18)10%十二烷基硫酸鈉(SDS)溶液

  在900ml水中溶解100g電泳級SDS,加熱至68℃助溶,加入幾滴濃鹽酸調節 溶液的pH值至7.2,加水定容至1L,分裝備用。

  【注意】

SDS的微細晶粒易擴散,因此稱量時要戴面罩,稱量完畢后要清除殘留在稱量工作區和天平上的SDS10%SDS溶液無須滅菌。


19)20×SSC溶液

  在800ml水中溶解175.3gNaCl88.2g檸檬酸鈉,加入數滴10mol/lNaOH溶液調節 pH值至7.0,加水定容至1L,分裝后高壓滅菌。


20)20×SSPE溶液

  在800ml水中溶解17.5g NaCl27.6g NaH2PO4·H2O7.4g EDTA,用NaOH溶液調節 pH值至7.4(約需6.5ml10ml/L NaOH),加水定容至1L,分裝后高壓滅菌。


21)X-gal溶液

X-gal5--4--3-吲哚-β-D半乳糖苷。用二基甲酰胺溶解X-gal配制成的20mg/ml的貯存液。保存于一玻璃管或聚丙烯管中,裝有X-gal溶液的試管須用鋁箔封裹以防因受光照而被破壞,并應貯存于-20℃X-gal溶液無須過濾除菌。


22) DEPC(焦碳酸二乙酯)處理水

100μLDEPC100mL水中,使DEPC的體積分數為0.1%。在37℃溫浴至少12h,然后在15psi 條件下高壓滅菌20min,以使殘余的DEPC失活。DEPC會與胺起反應,不可用DEPC處理Tris緩沖液。

23)甲酰胺(deionizedformamide)

直接購買或加DowexXG8 混合樹脂于裝有甲酰胺的玻璃燒杯中,用磁力攪拌器輕輕攪拌1h,可去除甲酰胺中的離子。經Whatman1號濾紙過濾除去樹脂后分成小份,充氮氣于-80℃貯存(防止氧化)。

24) 氨芐青霉素(ampicillin)(100mg/ml)

溶解1g氨芐青霉素鈉鹽于足量的水中,最后定容至10mL。分裝成小份于-20℃貯存。常以25μg/mL50μg/mL的終濃度添加于生長培養基。

25) 羧芐青霉素(carbenicillin)(50mg/ml)

溶解0.5g羧芐青霉素二鈉鹽于足量的水中,最后定容至10mL。分裝成小份于-20℃貯存。常以25μg/mL50μg/mL的終濃度添加于生長培養基。

26) 甲氧西林(methicillin)(100mg/ml)

溶解1g甲氧西林鈉于足量的水中,最后定容至10mL。分裝成小份于-20℃貯存。常以37.5μg/mL終濃度與100μg/mL氨芐青霉素一起添加于生長培養基。

27) 卡那霉素(kanamycin)(10mg/ml)

溶解100mg卡那霉素于足量的水中,最后定容至10mL。分裝成小份于-20℃貯存。常以10μg/mL50μg/mL的終濃度添加于生長培養基。

28) 氯霉素(chloramphenicol)(25mg/ml)

溶解250mg氯霉素足量的無水乙醇中,最后定容至10mL。分裝成小份于-20℃貯存。常以12.5μg/mL25μg/mL的終濃度添加于生長培養基。

29) 鏈霉素(streptomycin)(50mg/ml)

溶解0.5g鏈霉素硫酸鹽于足量的無水乙醇中,最后定容至10mL。分裝成小份于-20℃貯存。常以10μg/mL50μg/mL的終濃度添加于生長培養基。

30) 萘啶酮酸(nalidixic acid)(5mg/ml)

溶解50mg萘啶酮酸鈉鹽于足量的水中,最后定容至10mL。分裝成小份于-20℃貯存。常以15μg/mL的終濃度添加于生長培養基。

31) 四環素(tetracyyline)(10mg/ml)

溶解100mg四環素鹽酸鹽于足量的水中,或者將無堿的四環素溶于無水乙醇,定容至10mL。分裝成小份用鋁箔包裹裝液管以免溶液見光,于-20℃貯存。常以10μg/mL50μg/mL的終濃度添加于生長培養基。


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